相差、暗視野和熒光偏光顯微鏡的示范觀察
發(fā)布人：shpuda發(fā)布時(shí)間：2014/4/23
一、實(shí)驗(yàn)器材
1.菌種
大腸桿菌和釀酒酵母的培養(yǎng)斜面。
2.溶液和試劑
無(wú)菌水，香柏油，二甲苯，吖啶橙和蒸餾水等。
3.儀器和其他用品
相差偏光顯微鏡，暗視野聚光器，熒光顯微鏡，合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡，濾光片，載玻片和蓋玻片等。
二、目的要求
1.了解相差、暗視野及熒光顯微鏡的工作原理。
2.學(xué)習(xí)并掌握使用上述3種偏光顯微鏡觀察微生物祥品的基本方法。
三、基本原理
使用普通明視野顯微鏡進(jìn)行微生物樣品的觀察時(shí)通常需要對(duì)樣品進(jìn)行染色處理，以提高反差。這是因?yàn)槊饕曇捌怙@微鏡的照明光線直接進(jìn)人視野，屬透射照明，透明的活菌在明視野中會(huì)由于和明亮的背景間反差過(guò)小而不易看清細(xì)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)介紹的相差、暗視野及熒光顯微鏡，都是通過(guò)在成像原理上的改進(jìn)，提高了顯徽觀察時(shí)樣品的反差，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物活細(xì)胞的在接觀察。
(一)相差顯微鏡
在明視野下看起來(lái)透明的樣品如活細(xì)菌細(xì)胞，其不同部分的密度和折射率實(shí)際上是有差異的。光線通過(guò)這些樣品時(shí)，光波的相位因此發(fā)生變化.但這種相位變化不表現(xiàn)為明暗和顏色上的差異，不能為人眼所悠知。相差偏光顯微鏡到能通過(guò)其特殊裝置—環(huán)狀光闌和相板，將光的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)槿搜劭梢圆煊X(jué)的振幅差(明暗差)。如果產(chǎn)生的干涉為相長(zhǎng)干涉，則振幅的同相膠相加而變大(圖Ⅲ-9A)，該部分樣品的亮度加大;如果所產(chǎn)生的干涉為相消干涉(圖Ⅲ-9B),則振福的異相量相消而變小，這部分就變得較暗。這樣.變相位差為振幅差的結(jié)果，使原來(lái)透明的樣品會(huì)由于其內(nèi)部不同組分間光干涉現(xiàn)象的差異表現(xiàn)為明顯的明暗差異，對(duì)比度增加，能更加清晰地觀察到在普通光學(xué)偏光顯微鏡中看不到或看不清的活細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的某些細(xì)微結(jié)構(gòu)。
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