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    一、實驗器材

    1.菌種

    大腸桿菌和釀酒酵母的培養(yǎng)斜面。

    2.溶液和試劑

    無菌水，香柏油，二甲苯，吖啶橙和蒸餾水等。

    3.儀器和其他用品

    相差偏光顯微鏡，暗視野聚光器，熒光顯微鏡，合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡，濾光片，載玻片和蓋玻片等。

    二、目的要求

    1.了解相差、暗視野及熒光顯微鏡的工作原理。

    2.學(xué)習(xí)并掌握使用上述3種偏光顯微鏡觀察微生物祥品的基本方法。

    三、基本原理

    使用普通明視野顯微鏡進(jìn)行微生物樣品的觀察時通常需要對樣品進(jìn)行染色處理，以提高反差。這是因為明視野偏光顯微鏡的照明光線直接進(jìn)人視野，屬透射照明，透明的活菌在明視野中會由于和明亮的背景間反差過小而不易看清細(xì)節(jié)。本實驗介紹的相差、暗視野及熒光顯微鏡，都是通過在成像原理上的改進(jìn)，提高了顯徽觀察時樣品的反差，可以實現(xiàn)對微生物活細(xì)胞的在接觀察。

    (一)相差顯微鏡

    在明視野下看起來透明的樣品如活細(xì)菌細(xì)胞，其不同部分的密度和折射率實際上是有差異的。光線通過這些樣品時，光波的相位因此發(fā)生變化.但這種相位變化不表現(xiàn)為明暗和顏色上的差異，不能為人眼所悠知。相差偏光顯微鏡到能通過其特殊裝置—環(huán)狀光闌和相板，將光的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)槿搜劭梢圆煊X的振幅差(明暗差)。如果產(chǎn)生的干涉為相長干涉，則振幅的同相膠相加而變大(圖Ⅲ-9A)，該部分樣品的亮度加大;如果所產(chǎn)生的干涉為相消干涉(圖Ⅲ-9B),則振福的異相量相消而變小，這部分就變得較暗。這樣.變相位差為振幅差的結(jié)果，使原來透明的樣品會由于其內(nèi)部不同組分間光干涉現(xiàn)象的差異表現(xiàn)為明顯的明暗差異，對比度增加，能更加清晰地觀察到在普通光學(xué)偏光顯微鏡中看不到或看不清的活細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的某些細(xì)微結(jié)構(gòu)。